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大鼠網膜素ELISA試劑盒操作步驟注意點

時間:2023/12/11閱讀:411
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大鼠網膜素ELISA試劑盒操作步驟注意點:

1.加樣:

①實驗樣本過多時,可分批次操作,以減少實驗時間延長造成的誤差;

②加酶試劑后,用吸水紙吸干孔外試劑;

③作定量試驗時,使用加樣器加注試劑,并經常校正其準確性,此外,要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。

2.溫育:

①如有兩種溫度,盡量使用較低的溫育溫度、較長反應時間的條件;

②用1個小溫度計放置在板孔反應液中測量觀察;

③96孔板周圍孔與中心孔在溫育中的熱力學梯度會造成“邊緣效應",因此盡量采用水浴;

3.洗板:

①手工洗板時,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復合物脫離;

②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢,若被雜物堵塞時可用注射器針頭挑出;

③為了洗滌效果好,實驗室可采用機器與人工洗滌相結合的方法,在機器洗滌后再進行人工洗板1-2次,或適當增加洗板的次數;

4.顯色:

ELISA試劑盒中,如以四甲基聯苯胺(TMB)為底物,則提供的底物為A和B兩瓶應用液;如以鄰苯二胺(OPD)為底物,則試劑盒提供鄰苯二胺片劑或粉劑。顯色反應條件為37℃或室溫反應15-30 min。以鄰苯二胺(OPD)為底物的試劑,要臨用前30 min配制且必須避光。以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的試劑則不需避光,但A、B液應盡量避免接觸金屬器械。

5.判定:

讀取結果要在15-30 min內完成,定性測定用肉眼判讀試驗結果時,反應板應水平距離白色背景10-15 cm;定量測定時用酶標儀讀取結果,酶標儀不應置于陽光或強光照射下,需先預熱15-30 min再進行測試。


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