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實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real-time quantitative PCR),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
熒光定量PCR以其特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)成為了分子生物學(xué)研究中的重要工具,目前已得到廣泛應(yīng)用(如轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物檢測(cè)、RNAi基因失活率檢測(cè)、病原微生物或病毒含量檢測(cè)、基因差異表達(dá)、基因分型)。
qPCR檢測(cè)內(nèi)容:
1、 根據(jù)目的基因設(shè)計(jì)引物及引物合成
2、RNA抽提+逆轉(zhuǎn)錄
3、 RNA定量及質(zhì)量分析
4、使用熒光染料SYBR Green法進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR(重復(fù)三次)
5、 數(shù)據(jù)處理
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