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ELISA常用的五種培養方法

閱讀:328發布時間:2015-3-13

一、半連續式培養

1.ELISA半連續式培養又稱為重復分批式培養或換液培養。采用機械攪拌式生物反應器系統,懸浮培養形式。在細胞增長和產物形成過程中,每間隔一段時間,從中取出部分培養物,再用新的培養液補足到原有體積,使反應器內的總體積不變。 這種類型的操作是將細胞接種一定體積的培養基,讓其生長至一定的密度,在細胞生長至zui大密度之前,用新鮮的培養基稀釋培養物,每次稀釋反應器培養體積的1/2~3/4,以維持細胞的指數生長狀態,隨著稀釋率的增加培養體積逐步增加?;蛘咴诩毎鲩L和產物形成過程中,每隔一定時間,定期取出部分培養物,或是條件培養基,或是連同細胞、載體一起取出,然后補加細胞或載體,或是新鮮的培養基繼續進行培養的一種操作模式。剩余的培養物可作為種子,繼續培養,從而可維持反復培養,而無需反應器的清洗、消毒等一系列復雜的操作。在半連續式操作中由于細胞適應了生物反應器的培養環境和相當高的接種量,經過幾次的稀釋、換液培養過程,細胞密度常常會提高。

2.半連續式特點:

·培養物的體積逐步增加;

·可進行多次收獲;

·ELISA細胞可持續指數生長,并可保持產物和細胞在一較高的濃度水平,培養過程可延續到很長時間。 該操作方式的優點是操作簡便,效率高,可長時期進行,反復收獲產品,可使細胞密度和產品產量一直保持在較高的水平。在動物細胞培養和藥品中被廣泛應用。

二、連續式培養

1.連續式培養是一種常見的懸浮培養模式,采用機械攪拌式生物反應器系統。該模式是將細胞接種與一定體積的培養基后,為了防止衰退期的出現,在細胞達zui大密度之前,以一定速度向生物反應器連續添加新鮮培養基;同時,含有細胞的培養物以相同的速度連續從反應器流出,以保持培養體積的恒定。理論上講,該過程可無限延續下去。

2.連續培養的優點是反應器的培養狀態可以達到恒定,細胞在穩定狀態下生長。穩定狀態可有效的延長分批培養中的對數生長期。在穩定狀態下細胞所處的環境條件如營養物質濃度、產物濃度、pH值可保持恒定,細胞濃度以及細胞比生長速率可維持不變。細胞很少受到培養環境變化帶來的生理影響,特別是生物反應器的主要營養物質葡萄糖和*,維持在一個較低的水平,從而使他們的利用效率提高,有害產物積累有所減少。然而在高的稀釋率下,雖然死細胞和細胞碎片及時清除,細胞活性高zui終細胞密度得到提高;可是產物卻不斷在稀釋,因而產物濃度并為提高;尤其是細胞和產物不斷的稀釋,營養物質利用率、細胞增長速率和產物速率低下。

3.連續式培養不足:

·ELISA由于是開放式操作,加上培養周期較長,容易造成污染;

·在長周期的連續培養中,細胞的生長特性以及分泌產物容易變異;

·對設備、儀器的控制技術要求較高。 連續式培養操作使用的反應器多數是攪拌式生物反應器,也可以是管式反應器。

4.連續式培養的特點:

·細胞維持持續指數增長;

·產物體積不斷增長;

·可控制衰退期與下降期。


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