美國(guó)INBIOS 黑熱病抗體快速檢測(cè)試劑卡

【預(yù)期使用】

該檢測(cè)條用于診斷內(nèi)臟利什曼病，利用快速的免疫層析法在人血清中定性檢測(cè)杜氏利什曼原蟲(chóng)（L. donovani）抗體。該實(shí)驗(yàn)有助于診斷內(nèi)臟利什曼?。?/span>VL）。并只用于體外診斷。

【實(shí)驗(yàn)原理】

  該檢測(cè)條的硝化纖維膜在實(shí)驗(yàn)區(qū)包被了rK39，在質(zhì)控區(qū)包被了雞抗蛋白A。在實(shí)驗(yàn)中，血清樣本與膠體金共軛物（膠體金標(biāo)記的蛋白A）反應(yīng)，而膠體金共軛物預(yù)先包被在檢測(cè)條上?；旌衔镌诿?xì)管作用下沿著硝化纖維膜移動(dòng)，然后與重組的VL抗原反應(yīng)，并生成一條紅色帶。如果存在該紅色帶表明陽(yáng)性結(jié)果，反之則為陰性結(jié)果?；旌衔锢^續(xù)移動(dòng)，到達(dá)固化的雞抗蛋白A區(qū)（質(zhì)控區(qū)），會(huì)在質(zhì)控區(qū)生成一條紅色帶。質(zhì)控區(qū)紅色帶的出現(xiàn)說(shuō)明樣本體積充足、液體流動(dòng)適宜和作為對(duì)試劑的質(zhì)控。

【保存方法】

   該密封袋或者瓶中含實(shí)驗(yàn)檢測(cè)條應(yīng)保存在20—28℃（室溫）直至有效期。瓶中含捕獲緩沖液也應(yīng)保存在20—28℃。暴露在超過(guò)30℃溫度下會(huì)影響實(shí)驗(yàn)性能，所以應(yīng)盡量避免。檢測(cè)條不應(yīng)冰凍保存。從密封袋中取出后應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)使用，避免受濕度影響。

【試劑盒組成成分】

檢測(cè)條 25份

緩沖液一瓶

【儲(chǔ)存條件】

檢測(cè)條應(yīng)保存在20~30℃（室溫）直至有效期。Chase緩沖液也應(yīng)保存在20~30℃。暴露在超過(guò)30℃溫度下（多5天）會(huì)影響檢測(cè)性能，所以應(yīng)盡量避免。檢測(cè)條不應(yīng)冷凍保存，并且從密封袋中取出后應(yīng)在0.5小時(shí)內(nèi)使用，避免受濕度影響。

【樣本要求】

該實(shí)驗(yàn)中應(yīng)使用犬血清，不能使用全血樣本。不能對(duì)樣本進(jìn)行稀釋?zhuān)蟊M快離心分離血清，以避免溶血現(xiàn)象的產(chǎn)生。應(yīng)在采集血清后盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。血清不能長(zhǎng)時(shí)間存放在室溫下。血清于2~8℃可保存3天，更長(zhǎng)時(shí)間則應(yīng)保存在-20℃以下。實(shí)驗(yàn)前血清平衡至室溫。冷凍的血清必須充分融解。避免反復(fù)凍融。如果血清需要運(yùn)輸，其包裝應(yīng)該符合聯(lián)邦的傳染源運(yùn)輸法規(guī)。

【檢測(cè)步驟】

實(shí)驗(yàn)前讓血清平衡至室溫

從密封袋或瓶中取出檢測(cè)條

在檢測(cè)條箭頭下方加樣區(qū)加入20ul的血清

在小試管中，或者96孔的組織培養(yǎng)板的微孔中加入2-3滴（150ul）的Chase緩沖液

將檢測(cè)條插入小試管或者微孔中，根據(jù)檢測(cè)條上的箭頭，其末端應(yīng)該朝下

在10分鐘內(nèi)讀取結(jié)果。在讀取結(jié)果前，背景的清晰度是十分重要的。尤其是當(dāng)樣本含低滴度的抗利什曼原蟲(chóng)抗體時(shí)，就只有一條很弱的色帶出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)區(qū)（T）。10分鐘后讀取可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果

注意：不要只是加入Chase緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。必須首先加入20ul的血清。

如果在加入捕獲緩沖液后的10-15秒并沒(méi)有觀(guān)察到膠體金的移動(dòng)，可輕輕壓檢測(cè)條上的樣本加入?yún)^(qū)，直到觀(guān)察到膠體金的移動(dòng)。

【結(jié)果解釋】

陽(yáng)性結(jié)果

實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性則質(zhì)控帶（C）和實(shí)驗(yàn)帶（T）均出現(xiàn)。一條微弱的色帶也為陽(yáng)性結(jié)果。作為解釋指南，實(shí)驗(yàn)區(qū)的紅色帶的顏色強(qiáng)度與抗利什曼原蟲(chóng)抗體濃度相關(guān)。實(shí)驗(yàn)帶為“弱陽(yáng)性"血清樣本，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能為弱陽(yáng)性但可分辨的紅色帶，（“弱陽(yáng)性"樣本則含有對(duì)重組抗原低親和力或者低滴度抗體）。

陰性結(jié)果

實(shí)驗(yàn)為陰性，則只有質(zhì)控帶出現(xiàn)。沒(méi)有出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)帶

無(wú)效結(jié)果

質(zhì)控帶和檢測(cè)帶都沒(méi)有出現(xiàn)結(jié)果，若只有檢測(cè)帶出現(xiàn)紅色線(xiàn)，而質(zhì)控帶沒(méi)有出現(xiàn)，則也為無(wú)效結(jié)果

建議使用新的檢測(cè)條和新血清再次進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

注意：實(shí)驗(yàn)區(qū)的紅色帶的變化是依賴(lài)于抗利什曼原蟲(chóng)抗體濃度。然而，該實(shí)驗(yàn)不能檢測(cè)抗體的定量值和增加的百分比。

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