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上海瑞齊實業科技有限公司
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抗體來源(宿主):兔源、鼠源
克 隆:兔多克隆抗體鼠源單克隆抗體
類 型:一抗
性 狀: 凍干粉
保存條件:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C.
細胞流式實驗檢測操作方法 :
1. 每個樣品取2支流式檢測管,分別注明同型對照和待測,兩管分別加入106-7/100μl個待側細胞(若細胞濃度低或加入的細胞懸液較多,可1200轉/每分鐘,10分鐘低溫離心,棄上清,保證100μl被檢樣品)
2. 同型對照管中加入熒光標記同型對照抗體,做陰性對照;待測管中加入熒光標記的一抗,做為實驗管,各加3μl (按抗體使用說明書,一抗可做選擇幾個梯度1:20、50、100倍稀釋)混勻即可。
……
5. 上機檢測,先做同型對照,調整電壓至陰性區范圍,再測實驗管即可。
免疫熒光技術的實驗步驟1. 直接免疫熒光法測抗原
⑴基本原理
將熒光素標記在相應的抗體上,直接與相應抗原反應。其優點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少。缺點是敏感性偏低;而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體。此法常用于細菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。
⑵試劑與儀器
磷酸鹽緩沖鹽水(PBS):0.01mol/L,pH7.4
熒光標記的抗體溶液:以0.01mol/L,pH7.4的PBS進行稀釋
緩沖甘油:分析純無熒光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸鹽緩沖液1份配制
搪瓷桶三只(內有0.01mol/L,pH7.4的PBS 1500ml)
有蓋搪瓷盒一只(內鋪一層浸濕的紗布墊)
熒光顯微鏡
玻片架
濾紙
37℃溫箱等。
⑶實驗步驟
① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。
② 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間(參考:30min)。
③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不時振蕩。
④ 取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
⑤ 立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度,一般可用“+”表示:
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