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Anti-NECAB1抗體,神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體

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更新時間:2018-01-31 05:58:35瀏覽次數(shù):259次

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產(chǎn)品簡介

Anti-NECAB1抗體,神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體現(xiàn)貨供應,產(chǎn)品類型:一抗,產(chǎn)品應用:WB=1:100-500 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 Flow-Cyt=1:100-500 ICC=1:100-500 ,研究領域:免疫學 神經(jīng)生物學 干細胞 轉(zhuǎn)

詳細介紹

Anti-NECAB1抗體,神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體*,瑞齊生物抗體應用于WB、IHC、IF、ELISA等實驗中,*,提供完善的售前、售中、售后服務,咨詢或在線客服,我們將竭誠為您服務。在RICKY,我們堅持對產(chǎn)品質(zhì)量作不斷的評估、創(chuàng)新和改善以確保您對我們產(chǎn)品的高度信任!
【產(chǎn)品名稱】:Anti-NECAB1抗體,神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體

【規(guī)        格】:0.1ml/0.2ml
【濃        度】:1mg/1ml
【抗體來源】:Mouse,Rabbit or Goat
【克隆類型】:polyclonal or monoclonal
【產(chǎn)品類型】:一抗
【性        狀】:Lyophilized or Liquid
【亞        型】:IgG
【純化方法】:affinity purified by Protein A
【儲 存 液】:0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
【產(chǎn)品應用】:not yet tested in other applications.optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.
【保存條件】:Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20°C. When reconstituted in sterile pH 7.4 0.01M PBS or diluent of antibody the antibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C.
應用于WB實驗時的操作方法:蛋白提樣品制備
1、 將培養(yǎng)液吸入至15 ml離心管中,于2500 rpm離心5 min。
2、 棄上清,加入5 ml PBS并用槍輕輕吹打洗滌,然后2500 rpm離心5 min。棄上清后用PBS重復洗滌一次。
3、 用槍吸干上清后,加100 μl裂解液(含PMSF)冰上裂解30 min,裂解過程中要經(jīng)常彈一彈以使細胞充分裂解。
4、將裂解液4℃、12000 rpm離心5 min,取上清分裝于0.5 ml EP管中并置于-20℃保存。
5、BCA法測蛋白濃度
SDS-PAGE電泳
1、 玻璃板對齊后放入夾中卡緊,然后垂直卡在架子上準備灌膠。
2、按前面方法配10%分離膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。灌膠時,可用10 ml槍吸取5 ml膠沿玻璃放出,待膠面升到綠帶中間線高度時即可。然后膠上加一層水,液封后的膠凝的更快。(灌膠時開始可快一些,膠面快到所需高度時要放慢速度。操作時膠一定要沿玻璃板流下,這樣膠中才不會有氣泡。加水液封時要慢,否則膠會被沖變型。)
3、 當水和膠之間有一條折射線時,說明膠已凝了。再等3 min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。
4、 按方法配4%的濃縮膠,加入TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿濃縮膠后將梳子插入孔槽。灌膠時也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生。插梳子時要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后,兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出。
5、 用水沖洗濃縮膠,將其放入電泳槽中。
6、 測完蛋白含量后,計算含20-50 μg蛋白(根據(jù)自己的實驗需要進行選擇,沒有固定的量)的溶液體積即為上樣量。取出上樣樣品至200 μl的EP管中,加入5×SDS 上樣緩沖液至終濃度為1×。上樣前要將樣品于沸水中煮5-10 min使蛋白變性。
7、 加入足夠的電泳緩沖液后開始準備上樣。(電泳液至少要漫過內(nèi)測的小玻璃板。)用微量進樣器貼壁吸取樣品,將樣品吸出不要吸進氣泡。將加樣器針頭插至加樣孔中緩慢加入樣品(包括一孔做可視的蛋白marker)。(加樣太快可使樣品沖出加樣孔,若有氣泡也可能使樣品溢出。加入下一個樣品時,進樣器需在外槽電泳緩沖液中洗滌數(shù)次,以免交叉污染)
8、電泳:濃縮膠時用80-100 V跑,到分離膠以后用150-200 V跑,總時間2 h左右,電泳至溴酚蘭剛跑出即可終止電泳,進行轉(zhuǎn)膜。
轉(zhuǎn)膜
1、 轉(zhuǎn)一張膜需準備6張7.0~8.3 cm的濾紙和1張7.3~8.6 cm的NC膜。切濾紙和膜時一定要戴手套,因為手上的蛋白會污染膜。將切好的硝酸纖維素膜置于甲醇液中浸泡后使用。
2、在加有轉(zhuǎn)移液的搪瓷盤里放入轉(zhuǎn)膜用的夾子、兩塊海綿墊、一支玻棒、濾紙和浸過的膜。 將夾子打開使黑的一面保持水平。在上面墊一張海綿墊,用玻棒趕走氣泡。在墊子上墊三層濾紙。
3、將玻璃板輕輕撬開后剝膠,除去小玻璃板后,將濃縮膠輕輕刮去。小心剝下分離膠蓋于濾紙上,用手調(diào)整使其與濾紙對齊,輕輕用玻棒搟去氣泡。將膜蓋于膠上,要蓋滿整個膠(膜蓋下后不可再移動)并除氣泡。在膜上蓋3張濾紙并除去氣泡。zui后蓋另一個海綿墊,合起夾子。整個操作在轉(zhuǎn)移液中進行,要不斷的搟去氣泡。膜兩邊的濾紙不能相互接觸,接觸后會發(fā)生短路。
4、將夾子放入轉(zhuǎn)移槽槽中,使夾的黑面對槽的黑面,夾的白面對槽的紅面。電轉(zhuǎn)移時會產(chǎn)熱,在槽的一邊放一塊冰來降溫。一般用60 V轉(zhuǎn)移2 h或40 V轉(zhuǎn)移3 h。
免疫反應
1、將膜用TBS從下向上浸濕后,移至含有封閉液的平皿中,室溫下脫色搖床上搖動封閉1 h。
2、將一抗用TBST稀釋至適當濃度(在1.5 ml離心管中);將膜涂滿一抗溶液后置于濕盒中,4℃孵育過夜,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min。
3、同上方法準備二抗稀釋液并與膜接觸,室溫下孵育1~2 h后,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10 min;再用TBS洗一次,10 min,進行化學發(fā)光反應。
化學發(fā)光,顯影,定影
將A和B兩種試劑在保鮮膜上等體積混合;1 min后,將膜蛋白面朝下與此混合液充分接觸;1 min后,將膜移至另一保鮮膜上,去盡殘液,包好,放入X-光片夾中,曝光相應時間。沖洗膠片。
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本公司*供應免疫組化抗體、WB抗體、免疫組化試劑盒和抗體試驗所需全部相關(guān)試劑、熒光標記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實驗抗體,訂購優(yōu)質(zhì):

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