直腸上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物【Human Rectum MatchPair: Normal Rectum Epithelial Cell Derivatives and Primary Tumor Cell Derivatives】

人直腸上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物是從人直腸上皮細胞和腫瘤細胞中提取的，人直腸上皮細胞和腫瘤細胞分別從正常人直腸組織和腫瘤組織中制備。正常人直腸組織和腫瘤組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

 實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

腸出血性大腸桿菌致賀毒素1（Stx1）單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒481-Methyl-aminomethyl naphthalene144895

腸出血性大腸桿菌致賀毒素2（Stx2）單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48Terbinafine911611特比萘芬

腸出血性大腸桿菌黏附抹平因子（Eae）單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒48N-[3-Chloro-(3-fluorobenzyloxy)phenyl]-iodoquinazolin-amine23127

腸出血性大腸桿菌溶血素（Hly）單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒483-Chloro-(3-fluorobenzyloxy)nitrobenzene4438829

腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）單重?zé)晒?/span>PCR檢測試劑盒485-(4-((3-chloro-((3-fluorobenzyl)oxy)phenyl)amino)quinazolin-yl)furan-carbaldehyde2312784
Fingolimod hydrochloride  162359-56-0  中文名：鹽酸芬戈莫德  分子式：C19H34ClNO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISAKit  

Fingolimod  162359-55-9  中文名：芬戈莫德  分子式：C19H33NO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISAKit  

Finasteride  98319-26-7  中文名：非那雄胺  分子式：C23H36N2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISAKit  

Ficaprenol 11  26296-50-4  中文名：  分子式：C55H90O  度：%  關(guān)鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISAKit              

Fexofenadine hydrochloride  153439-40-8  中文名：鹽酸非索非那定  分子式：C32H40ClNO4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠雙酪酸（dityrosine）ELISA試劑盒
雙甘氨二肽  Gly-Gly  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 人紅細胞原卟啉(EP)試劑盒 Human erythrocyte protoporphyrin,EP ELISA Kit

重組人胰島素  Human recombinant Insulin  質(zhì)量規(guī)格：效價測定 人琥珀酰輔酶A合成酶(SCS)試劑盒 Human succinyl coenzyme A syhetase,SCS ELISA kit

人胰島素  Human Insulin  質(zhì)量規(guī)格：測定用 人花生四烯酸(AA)ELISA檢測試劑盒HumanArachidonicAcid,AAELISAKit 96T/48T

硝酸舍他康唑  Sertaconazole nitrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 人花生四烯酸(AA)試劑盒 Human Arachidonic Acid,AA ELISA Kit

醋酸依降鈣素   Elcatonin Acetate  質(zhì)量規(guī)格：BR 人花生四烯酸12 - 脂氧合酶，12S型(ALOX12/LOG12)試劑盒 Human ALOX12 ELISA Kit

醋酸恩夫韋地   Enfuvirtide Acetate  質(zhì)量規(guī)格：BR,>98% 人花生四烯酸15脂加氧酶(ALOX15/LOG15)試劑盒 Human ALOX15/LOG15 ELISA kit

D-海藻糖無水  D-(+)-Trehalose Anhydrous  質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BR 人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA檢測試劑盒Humanarachidonate5-lipoxygenase,ALOX-5ELISAKit 96T/48T

二醋酸戈那瑞林(LH-RH)  Gonadorelin Acetate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,二醋酸鹽 人花生四烯酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)試劑盒 Human Arachidonate 5-lipoxygenase,ALOX5/LOG5 ELISA kit

醋酸戈舍瑞林   Goserelin Acetate  質(zhì)量規(guī)格：BR,>98% 人踝蛋白(talin)ELISA檢測試劑盒HumaalinELISAKit 96T/48T

醋酸亮丙瑞林   Leuprolide Acetate  質(zhì)量規(guī)格：BR,>98% 人踝蛋白(talin)試劑盒 Human talin ELISA Kit
直腸上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物說明書胎球蛋白 -A(Fetuin-A)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Varenicline tartrate  375815-87-5  中文名：酒石酸伐侖克林  分子式：C17H19N3O6 

羧酸酯酶（CarE）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine hydrochloride  28783-41-7  中文名：  分子式：C7H10ClNS  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

損傷分子1   英文名稱：   Human Kidney Injury Molecule 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   KIM-1  4,4'-Dimethoxytrityl chloride  40615-36-9  中文名：4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷  分子式：C21H19ClO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

髓過氧化物酶（MPO）檢測   Myeloperoxidase (MPO) detection  Rasagiline mesylate  161735-79-1  中文名：甲磺酸雷沙吉蘭  分子式：3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

髓過氧化物酶（MPO）測試盒   Myeloperoxidase (MPO) test kit  Ranitidine hydrochloride  中文名：鹽酸雷尼替丁  分子式：C13H23ClN4O3S

運輸和保存：
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。