細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）小鼠B淋巴細胞；WEHI 231培養(yǎng)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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產(chǎn)品描述：
細胞名稱 小鼠B淋巴細胞；WEHI 231培養(yǎng)
形態(tài)特性淋巴母細胞

生長特性懸浮生長

特征特性必須有脂多糖(0.01-3mcg/ml)的誘導，WEHI-231細胞才向培養(yǎng)基分泌IgM。檢測表明肢骨發(fā)育畸

病毒(鼠痘)陰性。

培養(yǎng)條件DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05mMβ-

傳代方法1:2。3天內(nèi)可長滿。

傳代情況PN5

凍存條件*培養(yǎng)基+8%DMSO

支原體檢測陰性

STR

同工酶

染色體

注意事項：
?1.一般客戶拿到小鼠B淋巴細胞；WEHI 231培養(yǎng)后，應該注意什么？
客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出，留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
（1）客戶造成細胞污染，不重發(fā)；
（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（3）非推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
（4）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；
（5）細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
（6）細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；
（7）視具體情況而定。
CLEC5A Others Cynomolgus 食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人細胞裂解液 (陽性對照)

人胎盤絨膜癌細胞;BeWo

CM-R034大鼠肝動脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基100mL

SGC-7901/VCR細胞，人耐VCR胃腺癌細胞 人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞,BT-325細胞 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞;COS-7

COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞) 5×106cells/瓶×2

CA12 Others Human 人 CA12 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠B淋巴細胞；WEHI 231培養(yǎng)*Anti-V.choleraOgawa/FITC熒光素標記01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*ANti-V5tag/FITC熒光素標記V5tag標簽抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-V5tag/HRP辣根過氧化物酶標記V5tag標簽抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-V.choleraOgawa/FITC熒光素標記01群小川型霍亂弧菌抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-VCP/p97/FITC熒光素標記抗含纈酪肽蛋白抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-V.choleraOgawa/Biotin生物素化01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-V.choleraOgawa/Biotin生物素化01群小川型霍亂弧菌抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-InfluenzaAVirusH1/HRP辣根過氧化物酶標記羊抗季節(jié)性A型流感病毒H1抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-InfluenzaAVirusH3/HRP辣根過氧化物酶標記羊抗季節(jié)性流感病毒H3抗體IgG規(guī)格：0.2ml

*Anti-H1N1-A/HRP(InfluenzaAvirus)California辣根過氧化物酶標記兔抗季節(jié)性A型人流感病毒H1N1抗體IgG(美國加州型)規(guī)格：0.2ml
冷凍保存細胞之方法：
小鼠B淋巴細胞；WEHI 231培養(yǎng)冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。